敲除慢病毒

CRISPR/Cas9系统是一种原核生物的免疫系统，是细菌用来抵抗病毒和外源质粒入侵的一种防御机制。目前最成熟且应用最广的是Type II的CRISPR/Cas9系统，其原理是利用gRNA特异性识别靶序列，并引导Cas9核酸内切酶对靶序列的PAM上游进行切割，从而造成靶位点DNA双链断裂，随之利用细胞的非同源末端连接（NHEJ）或同源重组（HDR）的方式对切割位点进行修复，实现DNA水平的敲除、敲入或点突变。

慢病毒（Lentivirus）包装所用载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷1型病毒）为基础，使用疱疹病毒VSVG 外壳蛋白发展起来的工具载体。由于其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，且不具有自我增殖的能力，属于假型病毒。慢病毒具有感染谱广泛特点，并且可以有效感染分裂和非分裂细胞。侵染宿主细胞后，慢病毒利用反转录酶将其RNA转录成双链DNA，随后永久的整合到宿主细胞的染色体中，实现长时间稳定表达。 此外，慢病毒免疫原性低，不易造成免疫反应，所以现在慢病毒系统除了被广泛应用到各种细胞系、活体动物实验中。

敲除慢病毒即通过慢病毒将CRISPR/Cas9系统所需要的元件整合到目的细胞中，实现高效、长时间的发挥Cas9功能，实现有效敲除，避免了瞬转时的转染试剂的摸索、敲除效率低等问题。

三保一，最多6个位点，基本实现99.9%的敲除有效

在多种细胞、物种中验证有效