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将目的基因编码区序列(CDS)克隆到人工改造的启动子下游,将该复合元件导入细胞,利用人工改造的启动子驱动目的基因CDS的表达。此外,可添加报告基因进行示踪或抗性基因进行筛选。
慢病毒(Lentivirus)包装所用载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷1型病毒)为基础,使用疱疹病毒VSVG 外壳蛋白发展起来的工具载体。由于其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代,且不具有自我增殖的能力,属于假型病毒。慢病毒具有感染谱广泛特点,并且可以有效感染分裂和非分裂细胞。侵染宿主细胞后,慢病毒利用反转录酶将其RNA转录成双链DNA,随后永久的整合到宿主细胞的染色体中,实现长时间稳定表达。 此外,慢病毒免疫原性低,不易造成免疫反应,所以现在慢病毒系统除了被广泛应用到各种细胞系、活体动物实验中。
过表达慢病毒即通过慢病毒将人工改造的启动子-目的基因CDS序列的复合元件整合到目的细胞中,实现目的基因高效、长时间的过表达,避免了瞬转时的转染试剂的摸索、过表达不稳定等问题。