Tet-on慢病毒

Tet调控基因表达系统是以大肠杆菌Tn10转座子上Tet抗性操纵子为基础而建立的。Tet阻遏蛋白（Tet repressor protein, TetR）与Tet操纵子（Tet operator, TetO）能够特异性结合。当细胞内无Tet存在时，Tet会与TetO结合，从而阻断下游抗性基因表达；当有Tet存在时，Tet使TetR构象发生改变，导致TetR与TetO分离，使下游抗性基因得以表达，细菌从而获得耐药性。

慢病毒（Lentivirus）包装所用载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷1型病毒）为基础，使用疱疹病毒VSVG 外壳蛋白发展起来的工具载体。由于其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，且不具有自我增殖的能力，属于假型病毒。慢病毒具有感染谱广泛特点，并且可以有效感染分裂和非分裂细胞。侵染宿主细胞后，慢病毒利用反转录酶将其RNA转录成双链DNA，随后永久的整合到宿主细胞的染色体中，实现长时间稳定表达。 此外，慢病毒免疫原性低，不易造成免疫反应，所以现在慢病毒系统除了被广泛应用到各种细胞系、活体动物实验中。

Tet-on慢病毒通过慢病毒将Tet-on过表达/干扰系统所需要的元件整合到目的细胞中，实现高效率、精准、安全、可逆性的调控。

Tet-on过表达GFP测试结果

病毒侵染293T后，未加四环素的情况下，细胞照片如下：

未进行Puro药杀，添加四环素（终浓度10ug/mL）后，大约48H后的结果如下：

Tet-on干扰GAPDH测试结果